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蛋白质检测技术的不断创新

来源: http://www.grain17.com/  类别:实用技术  更新时间:2014-09-03  阅读


    为了对样品进行合理的分析,我们需要对蛋白质的具体组成结构进行合理的研究。蛋白质和一些抗体的研究已经是现在农业上比较重要的一项技术开发了,是进行优质蛋白质筛选的最适宜的一项措施。然而现在蛋白质的技术研究还是存在着一些局限性的,这些还是有待于我们取改善。我们在研究的过程中是需要使用自动型凯氏定氮仪来完成的,基于固定在几个平方微米上的作用单元的/微点0分析在原理上比传统的肉眼可见的免疫分析具有更高的灵敏度,更适于对分析物的测定。

    作为蛋白质天然结合物的抗体以一定的排列方式被固定在固体载体上形成了抗体微阵列。与此对应,发展了蛋白质微阵列技术以研究蛋白质的相互作用和修饰。尽管这些阵列被设想成为研究酶或抗体特异性的特征及阐明基因功能的一种有用工具,但这一技术存在的许多缺陷还未得到解决,限制了其潜在作用的完全发挥。这些限制因素包括生成足够的量、在固化过程中保持蛋白质的功能,以及提供所需的相对和绝对灵敏度。

    发展高容量的微阵列的步骤之一包括了通过高密度细菌斑点在硝酸纤维素膜上产生阵列。细菌表达和分泌的抗体片段提供给以滤膜为基质的 ELISA,用于辨别对供试抗原有特异性的抗体片段。所考虑的最后的步骤是在包被的玻璃片上纯化的蛋白质和抗体斑点的微缩化。玻璃片的刚性结构使得增加特征基团的密度及在降低样品溶液量的情况下提供定量化的分析成为可能。微阵列基质的一个关键条件是提供优化的结合条件。

    始终存在对于具有低非特异性背景和低差异性的高结合能力的关键需求。三维凝胶或膜包被的表面,如聚丙烯酰胺、琼脂糖和硝酸纤维素。这类表面主要通过物理吸附结合蛋白质,其优点在于它们被认为最适于保持天然蛋白质构像。然而,这类表面的缺点是信号强度的差异性较大.包括表面包被如树突或抗生物素蛋白片,结合了前两类表面后,在表面上表现出一种超分子结构。中国粮油仪器在线 http://www.grain17.com/