Biuret法测定蛋白质含量逐渐隐退的原因分析
来源： http://www.grain17.com/ 类别：实用技术 更新时间：2015-03-16 阅读次
蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。蛋白质的测定在不断的更新以及替换，但是不论时代如何的进步，蛋白质测定仪就有四种较为经典的检测 方法，凯氏定氮法（可以直接使用自动型凯氏定氮仪来进行替代），双缩尿法（Biuret法 ）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。这四种方法是即经典又传统的检测方法 ，四种方法中Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。即使这样在日常过程中时常会使用凯氏定氮仪测定的结果作为标准蛋白质，其中双缩尿法测定蛋白质含量慢慢的退出检测市场，究竟是何愿意促使的呢？
双缩脲法是传统的分光光度法测定蛋白质的方法。在进行测定的时候，必须预先用标准蛋白质溶液制作一个标准校正曲线，通常用牛血清白蛋白水溶液做蛋白质标准溶液。不同浓度的标准蛋白质溶液加入双缩脲试剂后，反应生成的颜色产物用紫外-可见分光光度计在540nm波长下测定吸光度，以双缩脲试剂加缓冲或水作空白对照。然后将测得的值分别对蛋白浓度(mg/ml)作图，得标准曲线。未知蛋白样品用双缩脲试剂做同样处理，根据测得吸光度值在标准曲线上直接查得未知蛋白质样品中得蛋白质浓度。
此方法对各种蛋白质呈色基本相同；特异性和准确度好，精密度好；呈色稳定性好，试剂单一，方法简便，但灵敏度不高，约为1mg，故现在已很少使用。在进行测定的过程中，样品的取用量的多少直接影响着测定的结果准确度，同时测量的稳定性远比使用凯氏定氮仪来得低很多。即使这种方法使用的人比较的少，但是这种检测方法仍然没有完全的退出这 个市场，在某些领域中依旧使用这种个方法进行测定。
双缩脲法是传统的分光光度法测定蛋白质的方法。在进行测定的时候，必须预先用标准蛋白质溶液制作一个标准校正曲线，通常用牛血清白蛋白水溶液做蛋白质标准溶液。不同浓度的标准蛋白质溶液加入双缩脲试剂后，反应生成的颜色产物用紫外-可见分光光度计在540nm波长下测定吸光度，以双缩脲试剂加缓冲或水作空白对照。然后将测得的值分别对蛋白浓度(mg/ml)作图，得标准曲线。未知蛋白样品用双缩脲试剂做同样处理，根据测得吸光度值在标准曲线上直接查得未知蛋白质样品中得蛋白质浓度。
此方法对各种蛋白质呈色基本相同；特异性和准确度好，精密度好；呈色稳定性好，试剂单一，方法简便，但灵敏度不高，约为1mg，故现在已很少使用。在进行测定的过程中，样品的取用量的多少直接影响着测定的结果准确度，同时测量的稳定性远比使用凯氏定氮仪来得低很多。即使这种方法使用的人比较的少，但是这种检测方法仍然没有完全的退出这 个市场，在某些领域中依旧使用这种个方法进行测定。
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